Сыек хроматография буенча санлы анализ принциплары һәм ысуллары

Сыек хроматографиянең аеру механизмы ике этап өчен катнашмадагы компонентларның якынлыгы аермасына нигезләнә.

Төрле стационар этаплар буенча сыек хроматография сыек-каты хроматографиягә, сыек-сыек хроматографиягә һәм бәйләнгән фаза хроматографиясенә бүленә.Иң киң кулланылганы - сыек-каты хроматография, тутыргыч итеп кремний гели һәм матрица кебек микросилика белән бәйләнгән фаза хроматографиясе.

Стационар этап формасы буенча сыек хроматографияне багана хроматографиясенә, кәгазь хроматографиягә һәм нечкә катлам хроматографиясенә бүлеп була.Адсорбция сыйдырышлыгы буенча аны адсорбция хроматографиясенә, бүлек хроматографиясенә, ион алмашу хроматографиясенә һәм гель үткәрү хроматографиясенә бүләргә мөмкин.

Соңгы елларда сыек багана хроматография системасына югары басымлы сыеклык агымы системасы өстәлде, аерылу эффектын яхшырту өчен, югары басым астында мобиль фазаны тиз агызу, шулай итеп югары эффективлык (шулай ук ​​югары басымлы) сыек хроматография. барлыкка килде.

БARTЛЕК
01 Сыек хроматографиягә санлы анализ принцибы

Сыйфатлы, саф матдәләр нигезендә бәяләү өчен стандартлар кирәк;

Сыек хроматография күләме чагыштырмача санлы ысул: ягъни катнашмадагы аналитик күләме билгеле күләмдә саф стандарт үрнәгеннән бәяләнә.

БARTЛЕК
02 Сыек хроматография буенча санлаштыру өчен нигез

Wлчелгән компонентның күләме (W) җавап бәясенә пропорциональ (иң биек биеклек яки иң югары мәйдан), W = f × A.

Санлы коррекция факторы (f): Бу сан исәпләү формуласының пропорциональ тотрыклылыгы, һәм аның физик мәгънәсе - берәмлекнең җавап бәясе (иң югары мәйдан) белән күрсәтелгән үлчәнгән компонент күләме.

Санлы төзәтү факторын билгеле күләмдә стандарт үрнәкләрдән һәм аның җавап бәясеннән алырга мөмкин.

Билгесез компонентның җавап бәясен үлчәгез, һәм компонент күләмен сан төзәтү факторы белән алырга мөмкин.

БARTЛЕК
03 Санлы анализда гомуми терминнар

Ampleрнәк (үрнәк): хроматографик анализ өчен аналитик булган чишелеш.Стандарт һәм билгесез үрнәкләргә бүленде.

Стандарт: билгеле концентрацияле саф продукт.Билгесез үрнәк (билгесез): концентрациясе тикшерелергә тиешле катнашма.

Weightрнәк авырлыгы: сыналачак үрнәкнең оригиналь үлчәве.

Тарту: билгесез үрнәкнең эретү факторы.

Компонент: сан ягыннан анализланырга тиешле хроматографик биеклек, ягъни эчтәлеге билгесез аналитик.

Компонент күләме (күләме): тикшерелергә тиешле матдәнең эчтәлеге (яки концентрациясе).

Бердәмлек: Хроматографик чокның иң югары мәйданын компьютер белән үлчәү процессы.

Калибрлау сызыгы: аналитикның билгесез эчтәлеген билгеләр өчен кулланылган, билгеле күләмдә стандарт матдәдән билгеләнгән җавап бәясенә каршы компонент эчтәлегенең сызыклы сызыгы.

БARTЛЕК
04 Сыек хроматографиягә санлы анализ

1. Сан анализы өчен хроматографик ысулны сайлагыз:

l Ачыкланган компонентның иң югары ноктасын раслагыз һәм 1,5 дән зуррак резолюциягә ирешегез

l Тестланган компонентларның хроматографик чокырларының эзлеклелеген (чисталыгын) билгеләгез

l Методның ачыклау лимитын һәм сан күләмен билгеләгез;сизгерлек һәм сызыклы диапазон

2. Төрле концентрацияләрнең стандарт үрнәкләре белән калибрлау сызыгы булдыру

3. Санлы ысулларның төгәллеген һәм төгәллеген тикшерегез

4. ampleрнәк җыю, мәгълүмат эшкәртү һәм нәтиҗәләр ясау өчен тиешле хроматография белән идарә итү программасын кулланыгыз

БARTЛЕК
05 Санлы биеклекләрне ачыклау (сыйфатлы)

Eachәрбер хроматографик биеклекне сыйфатлы итеп билгеләгез

Беренчедән, хроматографик чокның саклану вакытын (Rt) билгеләү өчен стандарт үрнәк кулланыгыз.Саклау вакытын чагыштырып, билгесез үрнәктә һәр хроматографик чокына туры килгән компонентны табыгыз.Хроматографик сыйфат ысулы - тоту вакытын стандарт үрнәк белән чагыштыру.Критерий җитәрлек түгелалга таба раслау (сыйфатлы)

1. Стандарт өстәмә ысул

2. Бер үк вакытта башка ысулларны кулланыгыз: бүтән хроматографик ысуллар (механизмны үзгәртегез, мәсәлән: төрле хроматографик баганалар куллану), бүтән детекторлар (PDA: спектрны чагыштыру, спектр китапханә эзләү; MS: масса спектр анализы, спектр китапханә эзләү)

3. Башка кораллар һәм ысуллар

БARTЛЕК
06 Санның иң югары эзлеклелеген раслау

Хроматографик иң югары эзлеклелекне раслагыз (чисталык)

Eachәр хроматографик чок астында бер генә үлчәү компоненты булуына инаныгыз

Берләшкән матдәләрнең (пычраклыклар) комачаулавын тикшерегез.

Хрестоматиянең иң югары эзлеклелеген раслау ысуллары (чисталык)

Спектрограммаларны фотодиод матрицасы (PDA) детекторлары белән чагыштыру

Чиста чисталыкны ачыклау

2996 Чисталык почмагы теориясе

07 өлештә еш кулланыла торган санлы ысуллар

Тышкы стандарт методка һәм эчке стандарт методка бүленгән стандарт сызык ысулы:

1. Тышкы стандарт ысул: сыек хроматографиядә иң күп кулланыла

Билгеле концентрацияләрнең стандарт үрнәкләре сериясе стандарт үрнәкләр буларак сынау өчен кушылмаларның саф үрнәкләрен кулланып әзерләнде.баганага аның җавап бәясенә кадәр (иң югары мәйдан).
Билгеле диапазонда, стандарт үрнәк концентрациясе белән җавап бәясе арасында W = f × A арасында яхшы сызыклы бәйләнеш бар, һәм стандарт сызык ясала.

Нәкъ шул ук эксперимент шартларында, үлчәнергә тиешле компонентның җавап бәясен алу өчен билгесез үрнәкне салыгыз.Билгеле булган коэффициент буенча, үлчәнергә тиешле компонентның концентрациясен алырга мөмкин.

Тышкы стандарт ысулның өстенлекләре:гади эш һәм исәпләү, ул еш кулланыла торган санлы ысул;һәр компонентны ачыклау һәм чистарту кирәк түгел;стандарт үрнәк кирәк;стандарт үрнәк һәм билгесез үрнәкнең үлчәү шартлары эзлекле булырга тиеш;инъекция күләме төгәл булырга тиеш.

Тышкы стандарт ысулның кимчелекләре:Эксперименталь шартлар югары булырга тиеш, мәсәлән, детекторның сизгерлеге, агым тизлеге, күчмә фазаның составы үзгәртелә алмый;һәр инъекция күләме яхшы кабатланырга тиеш.

2. Эчке стандарт ысул: төгәл, ләкин проблемалы, күпчелек стандарт ысулларда кулланыла

Катнаш стандарт ясау өчен стандартка билгеле күләмдә эчке стандарт өстәлә, һәм билгеле концентрациянең эш стандартлары әзерләнә.Катнаш стандарттагы эчке стандартка моляр коэффициенты үзгәрешсез кала.Хроматографик баганага кертегез һәм җавап бәясе итеп алыгыз.Valueавап бәясе һәм эш стандартының концентрациясе арасындагы сызыклы бәйләнеш буенча, W = f × A, стандарт сызык ясала.

Билгеле күләмдәге эчке стандарт билгесез үрнәккә өстәлә һәм үлчәнергә тиешле компонентның җавап бәясен алу өчен баганага кертелә.Билгеле булган коэффициент буенча, үлчәнергә тиешле компонентның концентрациясен алырга мөмкин.

Эчке стандарт ысулның үзенчәлекләре:Операция барышында үрнәк һәм эчке стандарт бергә кушылып, хроматографик баганага укол ясыйлар, шуңа күрә катнаш компонент күләменең катнаш эремәдәге эчке стандартка мөнәсәбәте даими булганда, үрнәк күләменең үзгәрүе. сан нәтиҗәләренә тәэсир итмәячәк..Эчке стандарт ысул үрнәк күләменең, хәтта мобиль фазаның һәм детекторның тәэсирен каплый, шуңа күрә ул тышкы стандарт ысулына караганда төгәлрәк.

БARTЛЕК
Санлы анализ нәтиҗәләренә тәэсир итүче 08 фактор

Начар төгәллек аркасында булырга мөмкин:

Дөрес булмаган мәйдан интеграциясе, үрнәкне бүлү яки пычрак әзерләү вакытында кертелгән пычраклар, мөһер мөһерләнмәгән, үрнәк яки эретеп торучы ватилизация, дөрес булмаган үрнәк әзерләү, инъекция проблемалары, эчке стандарт әзерлеге дөрес булмаган

Начар төгәллекнең мөмкин сәбәпләре:

Дөрес булмаган интеграция, инъекция яки инжектор проблемалары, үрнәк черү яки үрнәк әзерләү вакытында кертелгән пычраклыклар, хроматографик проблемалар, детекторның деградациясе.