Сыек хроматография - чимал, арадашчы, препаратлар һәм төрү материалларында һәр компонентның һәм пычракларның эчтәлеген сынау өчен төп ысул, ләкин күп матдәләргә таяныр өчен стандарт ысуллар юк, шуңа күрә яңа ысуллар эшләү котылгысыз. Сыек фаза ысулларын эшләгәндә, хроматографик багана сыек хроматографиянең үзәге булып тора, шуңа күрә хроматографик багананы ничек сайлау мөһим. Бу мәкаләдә автор өч аспекттан сыек хроматография баганасын ничек сайларга икәнен аңлатыр: гомуми идеялар, уйланулар һәм куллану күләме.
A. Сыек хроматография баганаларын сайлау өчен гомуми идеялар
1. Аналитикның физик һәм химик үзлекләрен бәяләгез: химик структура, эретүчәнлек, тотрыклылык (мәсәлән, оксидлашу / киметү / гидролизацияләү җиңелме), кислота һәм эшкәртү һ.б., аеруча химик структура төп. үзлекләрен билгеләү факторы, мәсәлән, конфигурацияләнгән төркем көчле ультрафиолетның үзләштерүенә һәм көчле флюоресенциягә ия;
2. Анализның максатын билгеләгез: югары аеру, югары багана эффективлыгы, кыска анализ вакыты, югары сизгерлек, югары басымга каршы тору, озын багана гомере, аз бәя һ.б. кирәкме?
- Уңайлы хроматографик багананы сайлагыз: хроматографик тутыргычның составын, физик һәм химик үзлекләрен аңлагыз, мәсәлән, кисәкчәләрнең зурлыгы, күзәнәк күләме, температурага чыдамлылыгы, рН толерантлыгы, аналитикның adsorption һ.б.
- Сыек хроматография баганаларын сайлау өчен уйланулар
Бу бүлектә хроматография баганасының физик һәм химик үзлекләре күзлегеннән хроматография баганасын сайлаганда каралачак факторлар каралачак. 2.1 Матрица
2.1.1 Силикат гел матрицасы Күпчелек сыек хроматография баганаларының тутыргыч матрицасы - кремний гели. Бу төр тутыргыч югары чисталыкка, аз бәягә, югары механик көчкә ия, һәм төркемнәрне үзгәртү җиңел (мәсәлән, фенил бәйләнеше, аминокомпания, циано бәйләнеше һ.б.), ләкин ул түзгән pH бәясе һәм температура диапазоны чикләнгән: күпчелек кремний гель матрица тутыргычларының pH диапазоны 2 - 8, ләкин махсус үзгәртелгән кремний гел бәйләнгән фазаларның pH диапазоны 1,5-10 га кадәр киң булырга мөмкин, һәм шулай ук аз үзгәртелгән кремний гел бәйләнгән фазалар бар, алар түбән pHда тотрыклы, pH 1 дән 8гә кадәр тотрыклы Agilent ZORBAX RRHD тотрыклы-C18 кебек; Силикат гель матрицасының югары температурасы чикләре гадәттә 60 is, һәм кайбер хроматография баганалары югары pH температурасында 40 tole температурасына түзә ала.
2.1.2 Полимер матрица Полимер тутыргычлар күбесенчә полистирол-дивинилбензол яки полиметакрилат. Аларның өстенлекләре шунда: алар киң pH диапазонына түзә алалар - аларны 1 - 14 диапазонында кулланырга мөмкин, һәм алар югары температураларга чыдамрак (80 ° C тан югары булырга мөмкин). Силикат нигезендәге C18 тутыргычлары белән чагыштырганда, бу төр тутыргыч гидрофобиклыкка ия, һәм макропор полимер белгечләр кебек үрнәкләрне аеруда бик эффектив. Аның җитешсезлекләре шунда: багананың эффективлыгы түбән, механик көче кремний нигезендәге тутыргычларга караганда көчсезрәк. 2.2 Кисәкчәләр формасы
Күпчелек заманча HPLC тутыргычлары сферик кисәкчәләр, ләкин кайвакыт алар тәртипсез кисәкчәләр. Сферик кисәкчәләр түбән багана басымын, югары багананың эффективлыгын, тотрыклылыгын һәм озын гомерен тәэмин итә ала; mobileгары ябышлыклы мобиль этапларны кулланганда (мәсәлән, фосфор кислотасы) яки үрнәк эремәсе ябыштырылганда, тәртипсез кисәкчәләр зуррак конкрет өслек мәйданына ия, бу ике этапның тулы хәрәкәтенә уңайлырак, бәясе чагыштырмача түбән. 2.3 Кисәкчәләр зурлыгы
Кисәкчәләрнең күләме кечерәк булса, багананың эффективлыгы һәм аерылуы шулкадәр югары, ләкин югары басымга каршы тору начаррак. Иң еш кулланыла торган багана - 5 мм кисәкчәләрнең зурлыгы; аеру таләбе зур булса, 1,5-3 мм тутыргыч сайланырга мөмкин, бу кайбер катлаулы матрицаның һәм күп компонентлы үрнәкләрнең аеру проблемасын чишү өчен уңайлы. UPLC 1,5 мм тутыргыч куллана ала; 10 мм яки зуррак кисәкчәләр зурлыктагы тутыргычлар еш ярым әзерлек яки әзерлек баганалары өчен кулланыла. 2.4 углерод эчтәлеге
Углерод эчтәлеге кремний гел өслегендә бәйләнгән фазаның пропорциясен аңлата, бу билгеле бер өслек мәйданы һәм бәйләнгән фазаны каплау белән бәйле. Carbonгары углерод эчтәлеге югары багана сыйдырышлыгын һәм югары резолюцияне тәэмин итә, һәм еш кына югары аеруны таләп иткән катлаулы үрнәкләр өчен кулланыла, ләкин ике этап арасындагы үзара бәйләнеш вакыты аркасында анализ вакыты озын; аз углеродлы хроматографик баганалар кыска анализ вакытына ия һәм төрле сайлап алу мөмкинлекләрен күрсәтә ала, һәм еш кына тиз анализ таләп итә торган гади үрнәкләр өчен һәм югары су фазасы шартларын таләп иткән үрнәкләр өчен кулланыла. Гадәттә, C18 углерод күләме 7% дан 19% га кадәр. 2.5 Кәүсәләрнең зурлыгы һәм махсус өслеге
HPLC adsorption медиа - күзәнәк кисәкчәләр, һәм күпчелек үзара бәйләнеш күзәнәкләрдә була. Шуңа күрә молекулалар тишекләргә керергә һәм аерылырга тиеш.
Кәүсәләрнең зурлыгы һәм конкрет өслек мәйданы - бер-берсен тулыландыручы төшенчәләр. Кечкенә күзәнәк күләме зур конкрет өслек мәйданын аңлата, һәм киресенчә. Зур конкрет өслек мәйданы молекулалар һәм бәйләнгән этаплар арасындагы үзара бәйләнешне арттырырга, тотуны көчәйтергә, үрнәк йөкләү һәм багана сыйдырышлыгын арттырырга, катлаулы компонентларны аерырга мөмкин. Тулы күзәнәк тутыргычлар бу төр тутыргычларга карый. Аеру таләпләре югары булганнар өчен зур өслек мәйданы булган тутыргычларны сайлау тәкъдим ителә. кечкенә махсус өслек мәйданы арткы басымны киметергә, багананың эффективлыгын яхшыртырга һәм градиент анализы өчен яраклы тигезлек вакытын киметергә мөмкин. Төп кабык тутыргычлары бу төр тутыргычларга карый. Аеруны тәэмин итү шартларында, югары анализ эффективлыгы таләпләре булганнар өчен кечкенә өслек мәйданы булган тутыргычларны сайлау тәкъдим ителә. 2.6 Күзәнәк күләме һәм механик көч
Чокыр күләме, шулай ук "күзәнәк күләме" дип тә атала, берәмлек кисәкчәсенә буш күләм күләмен күрсәтә. Ул тутыргычның механик көчен яхшы чагылдыра ала. Зур күзәнәк күләме булган тутыргычларның механик көче кечкенә күзәнәк күләме булган тутыргычларга караганда бераз зәгыйфь. 1,5 мл / гдан ким яки тигез булган күзәнәк тутыргычлар күбесенчә HPLC аеру өчен кулланыла, ә күзәнәк күләме 1,5 мл / г-тан зуррак тутыргычлар, нигездә, молекуляр чыгару хроматографиясе һәм түбән басымлы хроматография өчен кулланыла. 2.7
Каплау кушылмалар һәм силанол төркемнәре арасындагы үзара тәэсир аркасында килеп чыккан койрыкларны киметергә мөмкин (мәсәлән, эшкәртү кушылмалары һәм силанол төркемнәре арасында ион бәйләнеше, ван дер Вальс көчләре һәм кислота кушылмалары һәм силанол төркемнәре арасында водород бәйләнеше), шуның белән багананың эффективлыгын һәм иң югары формасын яхшыртырга мөмкин. . Капланмаган бәйләнгән этаплар, аеруча поляр үрнәкләр өчен, капланган фазаларга караганда төрле сайлап алулар китерәчәк.
- Төрле сыек хроматография баганаларының куллану күләме
Бу бүлектә кайбер очракларда сыек хроматография баганаларының куллану күләме сурәтләнәчәк.
3.1 Кире фазалы C18 хроматографик багана
C18 баганасы - иң еш кулланыла торган кире фазалы багана, ул күпчелек органик матдәләрнең эчтәлеген һәм пычраклык сынауларын канәгатьләндерә ала, һәм урта поляр, зәгыйфь поляр һәм поляр булмаган матдәләргә кагыла. C18 хроматографик багананың төре һәм спецификациясе аерым аеру таләпләренә туры китереп сайланырга тиеш. Мәсәлән, югары аеру таләпләре булган матдәләр өчен 5 μm * 4,6 мм * 250 мм спецификацияләр еш кулланыла; Катлаулы аеру матрицалары һәм охшаш полярлыгы булган матдәләр өчен 4 μm * 4,6 мм * 250 мм спецификацияләр яки кечерәк кисәкчәләр зурлыклары кулланылырга мөмкин. Мәсәлән, автор celecoxib API'да ике генотоксик пычракны ачыклау өчен 3 μm * 4,6 мм * 250 мм багана кулланган. Ике матдәнең аерылуы 2,9га җитә ала, бу бик яхшы. Моннан тыш, аеруны тәэмин итү шартында, тиз анализ кирәк булса, 10 мм яки 15 мм кыска багана сайлана. Мәсәлән, автор LC-MS / MS пиперакин фосфат API-ның генотоксик пычраклыгын ачыклау өчен кулланганда, 3 μm * 2,1 мм * 100 мм багана кулланылган. Пычраклык һәм төп компонент арасында аеру 2,0 иде, һәм үрнәкне табу 5 минутта тәмамланырга мөмкин. 3.2 Кире фазалы фенил баганасы
Фенил баганасы шулай ук кире фазалы багана төре. Бу төр багана хуш исле кушылмалар өчен көчле сайлап алу мөмкинлегенә ия. Гадәттәге C18 баганасы белән үлчәнгән хуш исле кушылмаларның реакциясе зәгыйфь булса, сез фенил баганасын алыштырырга уйлый аласыз. Мисал өчен, мин селекоксиб API ясаганда, бер үк җитештерүченең фенил баганасы белән үлчәнгән төп компонент реакциясе (барысы 5 μm * 4,6 мм * 250 мм) C18 баганасының 7 тапкырга якын иде. 3.3 Нормаль фазалы багана
Кире фазалы баганага эффектив өстәмә буларак, нормаль фазалы багана югары поляр кушылмалар өчен яраклы. Әгәр дә кире фазалы баганада 90% тан артык су фазасы белән эшләгәндә иң югары булса, һәм хәтта эретеп ябыштыручы белән якынлашса, сез гадәти фазалы багананы алыштырырга уйлый аласыз. Бу төр баганага хилик багана, аминок багана, циано багана һ.б. керә.
3.3.1 Хилик баганасы Хилик баганасы гадәттә поляр матдәләргә реакцияне көчәйтү өчен бәйләнгән алкил чылбырында гидрофилик төркемнәрне урнаштыра. Бу төр багана шикәр матдәләрен анализлау өчен яраклы. Автор ксилозаның эчтәлеген һәм аңа бәйле матдәләрне эшләгәндә бу төр багананы кулланган. Ксилоза туемының изомерлары да яхшы аерылырга мөмкин;
3.3. шикәр, аминокислоталар, нигезләр, амидларны аеру өчен; циан баганасы водородланган һәм водородсыз структур охшаш матдәләрне конвигатив бәйләнешләр булганга аерганда яхшырак сайлап алу мөмкинлегенә ия. Амино баганасы һәм циано баганасы еш кына гадәти фаз баганасы белән кире фаза баганасы арасында алыштырылырга мөмкин, ләкин еш күчү тәкъдим ителми. 3.4 Хираль багана
Хир баганасы, исеменнән күренгәнчә, хир кушылмаларын аеру һәм анализлау өчен аеруча фармацевтика өлкәсендә яраклы. Бу төр багана гадәти кире фаза һәм нормаль фаза баганалары изомерларны аеруга ирешә алмаганда каралырга мөмкин. Мәсәлән, автор 1,2-дифенилетиленедиаминның ике изомерын аеру өчен 5 μm * 4,6 мм * 250 мм хираль багана кулланган: (1С, 2С) -1, 2-дифенилетиленедиамин һәм (1Р, 2Р) -1, 2 -дифенилетиленедиамин, һәм икесенең аермасы якынча 2,0га җитте. Ләкин, хираль баганалар башка төр баганаларга караганда кыйммәтрәк, гадәттә 1W + / кисәк. Мондый баганаларга ихтыяҗ булса, агрегат җитәрлек бюджет эшләргә тиеш. 3.5 Ион алмашу баганасы
Ион алмашу баганалары корылма ионнарын аеру һәм анализлау өчен яраклы, мәсәлән, ион, протеин, нуклеин кислоталары һәм кайбер шикәр матдәләре. Тоткыч төре буенча, алар катион алмашу баганаларына, анион алмашу баганаларына һәм көчле катион алмашу баганаларына бүленәләр.
Кион алмашу баганаларына кальций һәм водород нигезендәге баганалар керә, алар нигездә аминокислоталар кебек катион матдәләрен анализлау өчен яраклы. Мәсәлән, автор кальций глюконатын һәм кальций асетатны анализлаганда кальций нигезендәге баганалар кулланган. Ике матдә дә λ = 210nm тәэсирендә көчле җавап бирделәр, һәм аеру дәрәҗәсе 3.0кә җитте; автор глюкоза белән бәйле матдәләрне анализлаганда водород нигезендәге баганалар кулланган. Берничә төп бәйләнешле матдәләр - малтоза, малтотриоз һәм фруктоза - дифференциаль детекторлар астында югары сизгерлеккә ия, ачыклау лимиты 0,5 минутка кадәр һәм аеру дәрәҗәсе 2,0-2,5.
Анион алмашу баганалары, нигездә, органик кислоталар һәм галоген ионнары кебек анионик матдәләрне анализлау өчен яраклы. Көчле катион алмашу баганалары ион алмашу сыйфаты һәм сайлап алу сәләтенә ия, һәм катлаулы үрнәкләрне аеру һәм анализлау өчен яраклы.
Aboveгарыда әйтелгәннәр - авторның үз тәҗрибәсе белән берләштерелгән берничә уртак сыек хроматография баганасының төрләре һәм куллану диапазоннары белән таныштыру. Факттагы кушымталарда башка махсус хроматографик баганалар бар, мәсәлән, зур күзәнәкле хроматографик баганалар, кечкенә күзәнәкле хроматографик баганалар, аффинит хроматография колонкалары, мультимодлы хроматографик баганалар, ультра югары җитештерүчән сыек хроматография колонкалары (UHPLC), суперкритик сыеклык хроматография колонкалары ( SFC) һ.б. Алар төрле өлкәләрдә мөһим роль уйныйлар. Хроматографик багананың конкрет төре үрнәкнең структурасы һәм үзенчәлекләре, аеру таләпләре һәм башка максатлар буенча сайланырга тиеш.
Пост вакыты: 14-2024 июнь